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除了臺(tái)盼藍(lán)染色法,以下這些方法也可以檢測細(xì)胞活性

更新時(shí)間:2025-05-13      點(diǎn)擊次數(shù):93
除了臺(tái)盼藍(lán)染色法,以下這些方法也可以檢測細(xì)胞活性:


  • MTT 比色法

    • 原理:活細(xì)胞中的線粒體脫氫酶能將 MTT(四唑鹽)還原成不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜,并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。通過測定甲臜在特定波長下的吸光度,可反映細(xì)胞的活性和數(shù)量。

    • 操作:將細(xì)胞接種到 96 孔板中,培養(yǎng)一段時(shí)間后加入 MTT 溶液,繼續(xù)孵育。然后去除上清液,加入二甲基亞砜(DMSO)溶解甲臜,用酶標(biāo)儀測定吸光度。

    • 應(yīng)用:常用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和藥物篩選等實(shí)驗(yàn)。

  • CCK - 8 法

    • 原理:與 MTT 法類似,細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶可以將 CCK - 8 試劑中的 WST - 8 還原成水溶性的橙黃色甲臜?;罴?xì)胞數(shù)量與甲臜生成量成正比,通過檢測吸光度來衡量細(xì)胞活性。

    • 操作:將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板,加入 CCK - 8 溶液,孵育后直接用酶標(biāo)儀測定吸光度。

    • 應(yīng)用:廣泛應(yīng)用于細(xì)胞活性檢測、細(xì)胞增殖分析、藥物篩選等領(lǐng)域。該方法操作簡便,靈敏度高,且無需裂解細(xì)胞。

  • 熒光染色法

    • 原理:利用一些熒光染料對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行特異性染色。例如,Calcein - AM 可被活細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解,產(chǎn)生綠色熒光,而死細(xì)胞由于酯酶活性喪失,不能產(chǎn)生熒光;碘化丙啶(PI)只能進(jìn)入死細(xì)胞,與 DNA 結(jié)合后發(fā)出紅色熒光。通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀察和分析。

    • 操作:將細(xì)胞與熒光染料孵育,然后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。

    • 應(yīng)用:可用于區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞,以及對(duì)細(xì)胞進(jìn)行定量分析,常用于細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等研究。

  • ATP 檢測法

    • 原理:ATP 是細(xì)胞內(nèi)的能量貨幣,活細(xì)胞中含有大量 ATP,而死細(xì)胞中的 ATP 會(huì)迅速降解。通過檢測細(xì)胞內(nèi) ATP 的含量,可反映細(xì)胞的活性。

    • 操作:使用熒光素 - 熒光素酶試劑盒,該試劑盒中的熒光素在熒光素酶和 ATP 的作用下會(huì)發(fā)出熒光,熒光強(qiáng)度與 ATP 含量成正比。將細(xì)胞裂解后加入試劑盒試劑,用熒光檢測儀測定熒光強(qiáng)度。

    • 應(yīng)用:常用于細(xì)胞活性檢測、細(xì)胞增殖分析以及藥物對(duì)細(xì)胞代謝的影響等研究。



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